Lectin histochemical aspects of the ovarian lamellae epithelium of Genypterus blacodes (Schneider, 1801) / Padrão de reação lectino-histoquímico do epitélio laminar ovariano em Genypterus blacodes (Schneider, 1801)

The composition and distribution of the glycoconjugates (GCs) secreted by the epithelium of ovarian lamellae with reference to the reproductive biology of Genypterus blacodes (Schneider, 1801) through lectin hi stochemistry is here discussed. In this species, the epithelial cells that line the ovarian cavity presented sharp morphological variations along the reproductive cycle related to the mucus secretion that accompanies oocyte ma turation. During sp awning season, residues of mannose and N-acetylglucosamine were detected in the glycocalyx of those cells using lectinhistochemistry. N- acetylgalactosamine and fucose were also observed in the same zone. The greatest variations in the lectinhistochemical pattern were found in the apical cytoplasm composition in comparison to the basal zone of the cells. The results of the present study were discussed by comparing their possible functional implications.

A composição e distribuição dos glicoconjugados (GCs) secretado pelo epitélio do ovário de lamelas com referência à biologia reprodutiva de Genypterus blacodes (Schneider, 1801) através da histoquímica com lectinas é aqui discutida. Nesta espécie, as células epiteliais que revestem a cavidade do ovário apresentou acentuada variação morfológica ao longo do ciclo reprodutivo relacionados com a secreção de muco que acompanha a maturação do oócito. Durante a época de desova, de resíduos de manose e N-acetilglicosamina foram detectados no glicocálix dessas células usando histoquímica de lectinas. N-acetilgalactosamina e fucose também foram observados na mesma zona. As maiores variações no padrão de lectinas foram encontradas na composição do citoplasma apical, em comparação com a zona basal das células. Os resultados do presente estudo foram discutidos, comparando as suas possíveis implicações funcionais.

Lechiguana em bovinos: aspectos patogênicos / Lechiguana in cattle: pathogenic aspects

Dois bovinos foram infectados com larvas de Dermatobia hominis na região escapular esquerda, e o local de infecção de um dos bovinos foi inoculado com Mannheimia granulomatis. Aos sete, 14, 21 e 28 dias, foram feitas biópsias cirúrgicas dos locais de inoculação das larvas para posterior estudo histológico, imuno-histoquímico e avaliação por microscopia eletrônica de transmissão. No bovino infectado somente com as larvas, as lesões histológicas se caracterizaram por dermatite eosinofílica, infiltrado de células mononucleares e proliferação de tecido conjuntivo. A inoculação simultânea de Dermatobia hominis e Mannheimia granulomatis provocou adicionalmente linfangite e microabscessos eosinofílicos, similares aos observados em casos espontâneos da enfermidade. Na amostra coletada aos 28 dias após a infecção bacteriana, foi observada, tanto na imuno-histoquímica, como por meio da microscopia eletrônica, a presença de corpos bacterianos aparentemente intactos no interior de fagossomas macrofágicos, sugerindo que a bactéria permanece dentro dos macrófagos até que algum fator desconhecido desencadeie o desenvolvimento da enfermidade. A Mannheimia granulomatis foi isolada de larvas coletadas aos 42 dias após a inoculação, demonstrando que a bactéria pode sobreviver por algum tempo na larva de Dermatobia hominis. Os dados do trabalho indicam que as larvas de Dermatobia hominis podem atuar como um fator contribuinte para o desenvolvimento da paniculite fibrogranulomatosa proliferativa.

Two cattle were infected at the left scapula with larvae of the Dermatobia hominis, while one of them was infected with the Mannheimia granulomatis. Biopsies of the lesions were taken at the 7, 14, 21 and 28 days p.i. for subsequent histopatological, immunohistochemical and electron microscopical studies. In the only animal infected with larvae, eosinophilic dermatitis, infiltration of mononuclear cells and proliferation of connective tissue characterized the histological lesions. The simultaneous inoculation of Dermatobia hominis and Mannheimia granulomatis caused, besides the characteristic lesions of the parasitosis, linfangitis and eosinophilic microabscesses, similar changes to those observed in spontaneous cases of the disease. In the samples taken after 28 days of the bacterial infection it was observed, in both immunohistochemestry and by electronic microscopy the presence of apparently intact bacterial bodies inside macrophages fagosomes, suggesting that the bacteria is inside the macrophages until some unknown factors trigger the development of the illness. Mannheimia granulomatis was isolated from larvae gathered 42 days after inoculation demonstrating that the bacteria can survive inside the larva Dermatobia hominis. Data from the study indicate that the larvae of Dermatobia hominis may act as a contributing factor to the development of proliferative fibrogranulomatous panniculitis.

Thymic atrophy in cattle poisoned with Solanum glaucophyllum / Atrofia do timo em bovinos intoxicados por Solanum glaucophyllum

Solanum glaucophyllum (Sg) [= S. malacoxylon] is a calcinogenic plant inducing "Enzootic Calcinosis" in cattle. The 1,25-dihydroxyvitamin D3, its main toxic principle, regulates bone and calcium metabolism and also exerts immunomodulatory effects. Thymocyte precursors from bone marrow-derived progenitor cells differentiate into mature T-cells. Differentiation of most T lymphocytes is characterized not only by the variable expression of CD4/CD8 receptor molecules and increased surface density of the T cell antigen receptor, but also by changes in the glycosylation pattern of cell surface glycolipids or glycoproteins. Thymocytes exert a feedback influence on thymic non-lymphoid cells. Sg-induced modifications on cattle thymus T-lymphocytes and on non-lymphoid cells were analysed. Heifers were divided into 5 groups (control, intoxicated with Sg during 15, 30 or 60 days, and probably recovered group). Histochemical, immunohistochemical, lectinhistochemical and morphometric techniques were used to characterize different cell populations of the experimental heifers. Sg-poisoned heifers showed a progressive cortical atrophy that was characterized using the peanut agglutinin (PNA) lectin that recognizes immature thymocytes. These animals also increased the amount of non-lymphoid cells per unit area detected with the Picrosirius technique, WGA and DBA lectins, and pancytokeratin and S-100 antibodies. The thymus atrophy found in intoxicated animals resembled that of the physiological aging process. A reversal effect on these changes was observed after suppression of the intoxication. These findings suggest that Sg-intoxication induces either directly, through the 1,25-dihydroxyvitamin D3 itself, or indirectly through the hypercalcemia, the observed alteration of the thymus.

Solanum glaucophyllum (Sg) [= S. malacoxylon] é uma planta calcinogênica que induz "Calcinose Enzoótica" em bovinos. O 1,25-dihidroxivitamina D3, seu principal agente tóxico, regula o metabolismo ósseo, o metabolismo de cálcio e também mostra efeitos na imunomodulação. Precursores de timócitos derivados da medula óssea se diferenciam em linfócitos T maduros. A diferenciação da maioria dos linfócitos T é caracterizada pela expressão variável de moléculas de receptores CD4/CD8 e densidade aumentada dos receptores antigênicos de superfície de células T. Alem disso, há mudanças no padrão de glicosilação de glicolipídeos na superfície celular ou de glicoproteínas. Timócitos mostram uma influência de retro alimentação em células tímicas não-linfóides. Foram analisadas modificações induzidas pelo Sg em linfócitos T e células tímicas não-linfóides de bovinos. Novilhas foram divididas em 5 grupos (controle, intoxicadas com Sg durante 15, 30 ou 60 dias, e grupo provavelmente recuperado). As diferentes populações celulares das novilhas experimentais foram caracterizadas com técnicas histoquímicas, imuno-histoquímicas, lectina-histoquímicas e morfométricas. As novilhas intoxicadas com Sg mostraram uma atrofia cortical progressiva que foi caracterizada usando a lectina aglutinina de amendoim (PNA) que reconhece timócitos imaturos. Estes animais também aumentaram as células não-linfóides tímicas por unidade de área, detectadas com a técnica de Picrosirius, lectinas WGA e DBA e anticorpos antipancitoqueratina e anti-S-100. A atrofia de timo observada nos animais intoxicados foi semelhante àquela do processo de envelhecimento fisiológico. Após supressão da intoxicação, foi observado um efeito de reversão nestas mudanças. Estes resultados sugerem que a intoxicação por Sg induza a alteração observada no timo diretamente, pela ação de 1,25-dihidroxivitamina D3, ou indiretamente, pela ação da hipercalcemia.

Profile of immune cells in lymph nodes draining human malignant tumors / Perfil de las células inmunes en los ganglios linfáticos que drenan tumores malignos humanos

The purpose of this study was to characterize and quantify cells involved in immune response in metastasis-free regional lymph nodes (RLNs) draining different human epithelial tumors and compare them (by immunohistochemistry) with control lymph nodes from patients with non malignant diseases. We showed that T cells number was decreased in RLNs as compared to the controls with reduction in both CD4+ T cells and CD8+ T cells subsets and an inverted ratio (CD4+: CD8+). B lymphocytes and follicular dendritic cells were decreased with respect to the controls. S100+ dendritic cells (DCs) and mature DCs were detected in T dependent areas. Their mean number was significantly lower as compared to control. Immature DCs were significantly diminished compared to RLN and control nodes. CD57+ cells, follicular T helper cells and/or NK cells, were localized in the clear zone of germinal centres and their mean number was significantly increased. There were no CD57+ cells in hypoplastic follicles. In this study we show that RLNs draining human cancer present reduction in almost all immune cells, except CD57+ cells. These findings may be related to the deficient anti-tumor immune response in patients with cancer and subsequent tumor progression.

El objetivo del trabajo fue caracterizar y cuantificar utilizando inmuno-histoquímica, las células involucradas en la respuesta inmune en ganglios linfáticos regionales (GLRs) que drenan distintos tumores epiteliales malignos humanos y compararlas con ganglios controles (GLCs) provenientes de pacientes sin enfermedad neoplásica maligna. Determinamos que los GLRs presentaban una marcada depleción de linfocitos B y T, células dendríticas (CD) foliculares y CD interdigitantes maduras respecto a los controles. En los linfocitos T, además de estar disminuidos, se observó una inversión de la relación T CD4+: T CD8+, a favor de los T CD8+. La depleción de CD inmaduras fue mayor respecto a las maduras. Las células CD57+, células foliculares T helper y/o células NK, localizadas en las zonas claras de los centros germinativos, presentaron un marcado incremento en los GLRs comparados con los GLCs, excepto en los casos de ganglios linfáticos con folículos hipoplásicos. En este estudio, demostramos que los GLRs que drenan carcinomas humanos presentan una significativa reducción en casi todas las células de la respuesta inmune, excepto las células NK. Estos hallazgos podrían estar relacionados con la deficiente respuesta antitumoral de los pacientes con cáncer y la subsiguiente progresión tumoral.

Intoxicação experimental com frutos de Melia azedarach (Meliaceae) em suínos / Experimental poisoning by fruits of Melia azedarach (Meliaceae) in pigs

Frutos maduros, triturados, de Melia azedarach foram administrados misturados à ração a 8 suínos em doses únicas de 5-20g/kg. Diarréia passageira foi o único sinal nos 2 suínos que consumiram 5g/kg. Os sinais clínicos observados nos animais que ingeriram doses únicas de 10, 15 e 20g/kg caracterizaram-se por incoordenação, tremores musculares, dificuldade para manter-se de pé, relutância para levantar-se, decúbito esternal e hipotermia. Os 2 suínos que ingeriram 20g/kg morreram. Macroscopicamente observou-se congestão do intestino delgado e da mucosa do estômago. As alterações histológicas caracterizaram-se por discreta a moderada necrose do tecido linfático, necrose dos músculos esqueléticos, congestão e necrose da mucosa gástrica e do intestino delgado e alterações degenerativas moderadas no fígado e rim. Os níveis séricos de AST e CPK aumentaram após a ingestão do tóxico. Observaram-se valores altos de CPK nos animais que morreram, evidenciando a mionecrose. Os resultados obtidos demonstram que, para suínos, a ingestão de altas doses de frutos de Melia azedarach induz ao aparecimento de sinais clínicos da intoxicação e causa lesões em diversos órgãos, inclusive a morte.

Bone changes caused by experimental Solanum malacoxylon poisoning in rabbits

The aim of this study was to describe the bone changes observed after a daily oral administration of the calcinogenic plant Solanum malacoxylon (syn. S. glaucophyllum) (Sm) during 9 days. The Sm-poisoned rabbits had an increase of bone resorption in the endosteal surface of the cortical zone and also in the surface covered by osteoblasts of the primary and secondary spongiosa of the trabecular bone compartment. Moreover, the epiphyseal growth plates in long bones appeared narrower than in the control rabbits, with reduction of the proliferative and hyperthrophic chondrocyte zones. The electron microscopic study revealed a significant decrease of proteoglycans in the hyperthrophic chondrocyte zone evidenced by a significant reduction of rutenium red positive granules in the poisoned rabbit. Altogether, these data suggest that cell differentiation may play a pivotal role in the pathogenesis of Sm-induced bone lesions.

Mycoplasma suis in naturally infected pigs: an ultrastructural and morphometric study

A eperitrozoonose suína é uma doença hemotrópica causada por Eperitrozoon suis, atualmente denominado Mycoplasma suis, uma bactéria extracelular que, aparentemente, adere à membrana dos eritrócitos suínos, induzindo sua deformação e lesionando-os. O presente trabalho busca estabelecer os aspectos estruturais e ultra-estruturais, pouco conhecidos, deste microorganismo. O estudo ultra-estrutural revelou a presença de estruturas correspondentes a túbulos disseminados no soma bacteriano. Observou-se também uma separação variável entre a membrana do microorganismo e a parede do eritrócito. O estudo morfométrico e a localização de M. suis pode permitir especulação sobre seu mecanismo de ação.

Immunohistochemical detection of Tritrichomonas foetus in experimentally infected mice

A necessidade de aumentar o conhecimento da patogenia da tricomoníase genital bovina (BGT) conduziu ao uso de modelos experimentais alternativos como o camundongo. Näo obstante, é necessário elucidar a dinâmica da infecçäo nesta espécie e avaliar as diferentes fases da colonizaçäo e evoluçäo das alterações patológicas. A imunohistoquímica (IHQ) oferece vantagens sobre as técnicas histoquímicas de rotina para a observaçäo do protozoário em tecidos, detritos celulares e dentro de macrófagos. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar pelo uso de uma técnica de IHQ a presença de Tritrichomonas foetus no sistema reprodutivo de camundongos infectados. Camundongos BALB/c fêmeas foram infectados pela via intravaginal, com uma suspensäo de T. foetus, na fase de estro, detectado com citologia exfoliativa vaginal. Depois de 10 semanas, os animais foram sacrificados; útero e vagina forma fixados e processados para histologia. Alguns cortes foram corados com HE. O restante dos cortes foi processado para IHQ. Foi usado um soro policlonal imunoadsorvido anti-T. foetus. A técnica de avidina-biotina (HistoMouse, ZymedÖ) foi empregada. Os estudos histopatológicos mostraram uma dilataçäo das glândulas uterinas, presença de macrófagos no lúmen do órgäo e parte interna das glândulas endometriais. T. foetus näo foi identificado por esse método. A IHQ permitiu identificar as mesmas lesões observadas e a presença do protozoário no endométrio, nas glândulas endometriais, no lúmen uterino e dentro de neutrófilos e macrófagos. O estudo citológico em lâminas coradas por IHQ, mostrou T. foetus aderido a células epiteliais, ou dentro de macrófagos. Esta técnica demonstra ser uma ferramenta útil para o estudo da patogenia da tricomoníase genital bovina (BGT) utilizando-se o camundongo como modelo experimental.

Detection of illegal estrogen administration through immunohistochemical markers in the bovine prostate

A imunodeteccäo de marcadores celulares foi avaliada em amostras prostáticas de bovinos com hiperplasia ou hiperplasia-metaplasia epiteliais, induzidas por estrógenos administrados ilegalmente e em próstatas de bovinos inoculados com dietilstilbestrol (DES). A técnica de recuperacäo antigênica permitiu o uso de tecidos fixados em formalina, por longos períodos. Foram utilizados os anticorpos monoclonais K8.12, anti-vimentina e anti-desmina para determinaçäo de células basais coradas/epitélio hiperplásico-metaplásico, células do estroma e células musculares, respectivamente. As alterações tissulares observadas nos casos de campo e nos experimentais foram semelhantes, através do que se concluiu que houve administraçäo ilegal de estrógenos. O teste imuno-histoquímico com esses marcadores específicos foi útil ao exame histológico da próstata, uma vez que a análise das imagens permite maior e melhor quantificaçäo das alterações observadas. Os testes bioquímicos, entretanto, säo necessários para uma avaliaçäo mais precisa

Detection of illegal estrogen administration through immunohistochemical markers in the bovine prostate

The immunodetection of diverse cell markers was evaluated in prostatic samples from bullocks, and bullocks showing epithelial hyperplasia-metaplasia, with oestrogen-induced changes, and in experimental samples from bullocks inoculated with dietylstilbestrol (DES). Antigen-retrieval procedures allowed the use of tissues that had been fixed in formalin for long periods. Three tissue markers were chosen for the study: cytokeratins 13 and 16, vimentin and desmin. Monoclonal antibody K8.12 (specific for cytokeratins 13 and 16) stained basal cells and hyperplastic-metaplastic epithelium; monoclonal antivimentin, and desmin, allowed the definition of fibromuscular changes.

A imunodeteccão de marcadores celulares foi avaliada em amostras prostáticas de bovinos com hiperplasia ou hiperplasia-metaplasia epiteliais, induzidas por estrógenos administrados ilegalmente e em próstatas de bovinos inoculados com dietilstilbestrol (DES). A técnica de recuperacão antigênica permitiu o uso de tecidos fixados em formalina, por longos períodos. Foram utilizados os anticorpos monoclonais K8.12, anti-vimentina e anti-desmina para determinação de células basais coradas/epitélio hiperplásico-metaplásico, células do estroma e células musculares, respectivamente. As alterações tissulares observadas nos casos de campo e nos experimentais foram semelhantes, através do que se concluiu que houve administração ilegal de estrógenos. O teste imuno-histoquímico com esses marcadores específicos foi útil ao exame histológico da próstata, uma vez que a análise das imagens permite maior e melhor quantificação das alterações observadas. Os testes bioquímicos, entretanto, são necessários para uma avaliação mais precisa.

Modificación del método original para la determinación de proteínas / Modification of the original method for protein determination

Se presenta una modificación de la técnica original para la determinación cuantitativa de proteínas, propuesta por Lowry y colaboradores. Se modificó la concentración de los reactivos empleados para dicha determinación, lo que permite una reducción en la cantidad de los mismos. Asimismo, se estandarizó en 10 min el tiempo de incubación con cada uno de los reactivos empleados, reduciendo, de esta manera, a sólo 20 min el tiempo para la lectura de la reacción. La densidad óptica se leyó con una longitud de onda de 660 nm. Esta técnica ha demostrado ser tan sensible para la determinación proteica de los líquidos corporales analizados, como la originalmente propuesta por Lowry y col